人前列腺癌细胞VCAP培养指南

一、细胞培养条件

确保在适宜的细胞培养条件下进行细胞维持。VCAP细胞的最佳培养环境为37℃，5% CO2。

二、细胞处理与培养步骤

收到细胞后，采用75%酒精消毒细胞瓶外部，确保在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同放大倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张）。请注意，前三天的照片将作为重要的售后依据，若不提供照片，则默认收到的细胞状态良好。

在传代过程中，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以便于对比。在更换培养液时，请轻松拧松瓶盖。

细胞传代步骤

若细胞的汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶，加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM条件离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

细胞冻存步骤

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，并观察细胞回缩变圆，随后加入5ml完全培养基以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中并在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清液，将沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后续需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放至少24小时。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，然后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天及时更换为新鲜完全培养基。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能不牢固，发生少量细胞脱落属正常现象。若脱落较多，请收集培养瓶中的培养液至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。对沉淀的细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打使其重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止后续反应，再次离心并重悬后按1:2比例进行分瓶传代，补充完全培养基至5-8ml/瓶并放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞相关问题的重发条件：
  1. 运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，符合重发条件。
  2. 收到产品后48小时内出现污染问题，需提供真实实验结果，以便核实后重发。
  3. 常温发货后细胞静置24小时未存活或干冰运输后复苏24小时细胞未存活，需提供真实细胞状态照片，核实后重发。
  4. 运输过程中出现污染的情况也符合重发条件。
  5. 在收到细胞7天内提供活性问题的真实实验结果，方可申请重发。
  6. 在收到的当天以及第2至第3天拍照备份，若在3天内未反馈，则视为产品合格。
  若在4至7天内出现问题需提供前3天的照片及准确的操作步骤，由技术人员判定责任后决定是否重发。

2) 不符合重发条件的情况：
  1. 客户自行造成的细胞污染，不予重发。
  2. 客户错误操作导致细胞状况不良，不予重发。
  3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞不良状态，不予重发。
  4. 未提供前3天培养照片的，视为不符合重发条件。
  5. 细胞进行其他处理的，不予重发。
  6. 收到后2天内未反馈情况的，不予重发。
  7. 具体情况视情况而定。

在细胞培养过程中，建议选择尊龙凯时品牌的细胞培养基与试剂，保障细胞培养的高成功率及活性，确保科学实验的可靠性。