稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种常用的实验技术，用于评估抗菌剂抑制微生物生长的能力，主要有微量稀释法和常量肉汤稀释法两种方式。琼脂稀释法因其操作简便、成本低且适合高通量筛选，特别适合自动化操作与药物浓度的精确控制。而肉汤稀释法则直观、易于操作，适合实验室规模的测试，并能根据需要调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理 本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中，然后接种细菌。通过观察细菌的生长情况，确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)。该方法特别适用于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤

(1) 抗（抑）菌溶液的配制：以无菌操作取5ml或5g（固体研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，制成10%的均匀分散溶液或悬液。

(2) 含抗菌剂培养基的配制：将已配成10%的抗（抑）菌溶液用PBS进行系列稀释，制备不同浓度的受试液，置于45℃～50℃的水浴恒温备用。

(3) 双倍浓度培养基的制备：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾溶解。经过121℃的压力蒸汽灭菌15分钟后，置于45℃～50℃的水浴中备用，此培养基将用于稀释抗（抑）菌溶液或悬液。

(4) 含抗（抑）菌液培养基的配制：分别取10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内，再添加10ml在45℃～50℃水浴中的双倍MH琼脂培养基，边加边摇晃平板，使抗（抑）菌液与培养基充分混匀，待凝固后备用。

(5) 用加样器取1μl～2μl（含菌量约为107 cfu/ml）的菌悬液点种于含抗（抑）菌液培养基的平皿，接种后形成的菌液圈直径约为5mm～8mm（每个点菌量约为104 cfu）。

(6) 以相同的方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板，作为阳性对照。

(7) 将接种后的平板放置于35℃培养箱中，倒置培养18h～24h，观察结果。

3. 评判 规定菌落生长被完全抑制的最低抗（抑）菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC。单一菌落生长可忽略不计。

营养肉汤稀释法

1. 原理 本实验将不同浓度的抑菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中，然后接种细菌。通过观察细菌的生长情况，确定抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)。此方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤

(1) 按2112所示方法制备的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。

(2) 含抗菌剂培养基的制备：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水进行系列稀释，各稀释度受试液25ml与25ml双倍浓度的营养肉汤混合在试管中。

(3) 取0.1ml（含菌量约为108 cfu/ml）的菌悬液接种于含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中，作为试验组样本。

(4) 同样方式接种不含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中，作为阳性对照组样本。

(5) 取2支含有营养肉汤的试管，作为阴性对照组样本。

(6) 将试验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中，培养48小时，观察结果。

(7) 在试验中应对试验用菌悬液进行活菌计数，其作用浓度应为5×10^5 cfu/ml～5×10^6 cfu/ml。

3. 评判 当阳性对照管中细菌生长（混浊），阴性对照管中不再有细菌生长（透明），试验用菌悬液的作用浓度为5×10^5 cfu/ml～5×10^6 cfu/ml时，试验组不再有细菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度，即为该样品对受试菌的MIC。选择合适的检测方法，以及高效的抗菌产品，如尊龙凯时，将会有效提升微生物抑制能力。