尊龙凯时提供的人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC是用于基础和临床研究的重要细胞系。以下为细胞培养及处理指南，确保研究的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10% FBS + 1% P
传代方法：首次建议1:2传代；传代情况每2天换液
备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接采购我们的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

细胞到达后，需培养至良好状态，将完全培养液灌满瓶口并封好，以确保细胞在运输过程中的稳定。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后，放置于超净台中进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复状态。使用显微镜观察细胞生长并拍照留存（建议至少拍摄40x、100x、200x倍各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。建议在传代后使用一瓶原瓶完全培养基，另一瓶使用自配完全培养基以便对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中培养；
2. 若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 丢弃培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分已脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基，以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶80%时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶中，观察细胞状态，当细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化；轻轻吹打使之脱落，并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，用无血清冻存液（货号：C7001）重悬细胞，混合均匀后转入冻存管中；
4. 将细胞冻存管直接放入-80℃冰箱。若需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，待无结晶后擦拭外壁消毒；
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养；
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会发生脱落，属于正常现象。如遇大量脱落，可将培养液收回至离心管中，1000rpm离心5分钟以收集细胞，再用胰酶处理后重悬。随后，可按照上述传代步骤进行操作。

五、售后条款

关于细胞出现问题的重发原则：
1. 运输途中出现的损失或污染，经核实后可重发；
2. 收到细胞48小时内报告真实结果，经过确认后重发；
3. 根据状态照片判断活性或污染，重发条件详见相关标准。

在使用尊龙凯时产品时，请务必遵循规范操作，以保证细胞的健康生长和实验结果的准确性。如遇到问题，欢迎及时与我们的技术支持团队联系，以便获得妥善处理。