尊龙凯时提供的人骨肉瘤细胞MG63培养说明书包括以下几个方面：

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代，2天后更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞达到良好状态后，应灌满完全培养液并封好瓶口，这样是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好在40x、100x和200x条件下各拍一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，在37℃、5%CO2的孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。当大部分细胞变圆并脱落后，迅速拿回操作台，轻轻敲击培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱中，如果后期需要转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中容易脱落，这是一种正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中所有液体收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行对比培养，然后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再添加5ml完全培养基终止反应，随后重新离心，弃去上清，再加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准

1. 细胞在运输过程中遭遇的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等情形，均可重发。
2. 若细胞出现污染问题，需在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，如果多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 在常温发货的细胞静置4小时后，且未开封，出现污染问题的情况下，可以重发。
5. 如需确认细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可进行重发。
6. 在收到细胞当天及第2、3天内拍摄照片，若3天内未告知问题，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，则需提供收到细胞前3天的照片及相关操作详细记录，经技术人员评定为我方责任的可重发。

2）不予重发的情况

1. 若因客户原因导致细胞污染，则不予重发。
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳，亦不予重发。
3. 使用非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，将不予重发。
4. 如果细胞状态不佳且未提供培养前3天的照片，则不予重发。
5. 在细胞培养过程中进行其他处理的，也不予重发。
6. 收到细胞后的2天内未告知问题，亦不予重发。
7. 具体情况将根据实际情况而定。